Table des matières
Xueping Chen, Weixiong Huang, Fengjiang Cheng, Xiaomin Zhang, Ru Li, Caïn Hung
Ausmetics Produits chimiques quotidiens (Canton) Co. Ltd. N ° 1 Jinxiu Rd, Guangzhou économique & District de développement technique, Chine.
1. Introduction
Dermatite atopique (ANNONCE), Également connu sous le nom d'eczéma et d'exzame atopique, est un chronique commun, maladie cutanée inflammatoire récurrente qui affecte autour 20% des enfants, et jusqu'à 10% des adultes dans les pays à revenu élevé [1], et affectent la population croissante dans les pays en développement [2]. Les causes de la MA sont complexes et multifactorielles. Les études sur les jumeaux de la famille AD révèlent environ 75% héritabilité génétique [3-5]. La MA se caractérise par des fonctions de barrière épidermique perturbées, dont les caractéristiques de base incluent une peau sèche., lésions aiguës et chroniques ressemblant à de l'eczéma, et prurit intense [2]. Staphylocoque doré (S. auréus) la colonisation serait un déclencheur important de la MA[6]. La prise en charge cutanée de la maladie d'Alzheimer vise à améliorer les symptômes et doit être centrée sur les brevets et inclure l'évitement des facteurs déclencheurs individuels., immunité, y compris la régulation anti-inflammatoire et anti-allergique, et restauration des fonctions de barrière cutanée [2,7]. Alors que le marché manque encore de produits cosmétiques de soins quotidiens efficaces pour les consommateurs de MA.
Dans cette étude, nous avons développé une crème nommée AUS AD cream pour les consommateurs AD, cibler pour soulager les démangeaisons et l'inconfort, contrôle S. auréus prolifération, et réparer la barrière cutanée. Ingrédients d'origine végétale tels que l'EXTRAIT DE FEUILLE D'ARTEMISIA ANNUA, EXTRAIT DE RACINE DE PUERARIA LOBATA, EXTRAIT DE FLEUR DE CROCUS SATIVUS, et ROSMRINUS OFFICINALIS LEAF EXTRACT ont été utilisés pour supprimer S. auréus, anti-inflammatoire, et anti-allergie[8-12]. Autres principes actifs tels que les céramides, ADH, GOMME BIOSACCHARIDE-2, ECTOINE, UCCINOGLYCAN etc.. ont également été incorporés pour leurs effets bénéfiques sur la barrière cutanée[13-15]. L'efficacité de la crème AUS AD a été évaluée par in vitro anti- S. auréus essai, in vitro test cutané utilisant la crème Desonide comme référence, et en vain expériences cliniques.
2. Matériels et méthodes
2.1 Exemples d'expériences
La cible de la présente étude nommée crème AUS AD, qui contenait des ingrédients majeurs, dont AQUA, PÉTROLATUM, BUTYROSPERMUM PARKII (KARITÉ) BEURRE, DIMÉTHICONE, BUTYLÈNE GLYCOL, BÉTAÏNE, SQUALANE, TRIGLYCÉRIDES C10-18, ALCOOL SPERMACÉTYLIQUE, STÉARATE DE GLYCERYL, ESTER OLÉATE, ECTOINE, MONTANT ESTHER, POLYSORBATE 60, PEG-100 STÉARATE, 1,2-HEXANEDIOL, 1,2-PENTANOL, LAURYL ISÉTHIONATE DISODIQUE/COPOLYMÈRE VP ，HYDROXYACÉTOPHÉNONE, C18-36 TRIGLYCÉRIDE D'ACIDE, ALLANTOÏNE, ACIDE DODÉCANE-1,6-DIOIQUE, DÉCÈNE HYDROGÉNÉ, 1,3-PROPANÉDIOL, et EXTRAIT DE FEUILLE D'ARTEMISIA ANNUA, et des ingrédients mineurs, notamment le triglycéride d'acide C12-18, UCCINOGLYCAN, EXTRAIT DE RACINE DE PUERARIA LOBATA, CÉRAMIDE NP, GOMME BIOSACCHARIDE-2, PLANTASCOLANOL, CÉRAMIDE AP, ACIDE STÉARIQUE, LÉCITHINE HYLORINÉE, HYDROCHOLESTÉROL, EXTRAIT DE FLEUR DE CROCUS SATIVUS, TÉTRACÉTYLPLANTOL, GOMME FLAVONOÏDE, TOCOPHÉROL, CÉRAMIDE EOP, EXTRAIT DE FEUILLE DE ROSMRINUS OFFICINALIS, PALMITATE DE L-ASCORBYLE, et GLYCOSPINGOLIPIDES.
Autres consommables et réactifs obtenus pour cette étude: La crème désonide, souvent utilisée pour soulager les symptômes de la MA, a été incluse comme produit de référence. (Magasin pharmaceutique de Guangzhou, Chine), in vitro Épicoute® peau (Numéro de lot: ES241206) et milieu EpiGrowth de Guangdong Biocell Biotech Co. Ltd, PolyI: C, lipopolysaccharide (E.Coli), WY14643, Antibiotique FLG, LOR anticorps, Anticorps AQP3, Anticorps IVL, et kit TSLP ELISA d'Abcam, PBS de Solarbio, dexaméthasone de NICPBP, paraformaldéhyde de Biosharp, Xylène de SINOPHARM, Hématoxyline et Eosine de Beyotime. [La crème AUS AD et la crème Desonide ont été codées pour des tests aveugles afin d'éviter tout biais éventuel.]
2.2 Test antibactérien in vitro contre S. auréus
L'activité antibactérienne contre S. auréus a été évalué à l'aide de la méthode quantitative de suspension décrite dans le QB/T 2738-2023 “Méthodes standard d'évaluation de l'efficacité antibactérienne des désinfectants”. Pour commencer, une suspension bactérienne de S. auréus (ATCC 6538) était préparé à une concentration de 1 x 104 unités formant des colonies (UFC) par millilitre (ml). Un mélange a été créé en combinant 0.1 mL de cette suspension bactérienne avec 5.0 mL de la solution échantillon et en agitant soigneusement le mélange. Après incubation à température ambiante pendant 6 les heures, 0.5 mL du mélange incubé a été transféré dans 4.5 mL de solution saline stérile tamponnée au phosphate (PBS), mélangé pour un supplément 10 min, et puis 1 mL de cette solution a été étalé sur des plaques de gélose. Trois plaques répétées ont été préparées pour chaque échantillon. Les plaques ont été incubées à 36 ± 1°C pour 48 H. Après l'incubation, le nombre de colonies bactériennes sur chaque plaque a été compté. Des expériences en triple ont été menées pour chaque échantillon afin de garantir la fiabilité des données. De l'eau stérile a été utilisée comme contrôle négatif dans ces tests. S. auréus le taux de suppression a été calculé comme suit (Colonie no.échantillon – Colonie n°négatif)/ Colonie n°négatif) ×100 %.
2.3 Test cutané in vitro
Échantillons de tissus cutanés EpiKutis®, chaque mesure (24 ± 2) mm², ont été cultivés dans un environnement contrôlé en utilisant un milieu de culture de tissus cutanés in vitro à 37°C avec une concentration de CO2 de 5% pour une période de 5 journées. Suite à cette première période de culture, les surfaces cutanées ont été traitées avec des échantillons cosmétiques à la même température et concentration de CO2 pendant 24 H. Ensuite, les échantillons ont été exposés à une combinaison de PolyI:C et LPS pour un supplément 24 H. La configuration expérimentale comprenait des contrôles négatifs et positifs. Le contrôle négatif consistait en un traitement modèle avec 24 µg/mL PolyI:C et 20 µg/mL de LPS. Le contrôle positif impliquait l’ajout de 50 μM WY14643 au PolyI:C + Traitement LPS. Un groupe supplémentaire traité avec PolyI:C + LPS et 0.01% la dexaméthasone a été incluse comme contrôle positif pour l'analyse TLSP. Chaque traitement a été répliqué trois fois pour garantir la fiabilité des résultats. Après la période de traitement, les tissus ont subi un traitement et une analyse plus approfondis comme détaillé ci-dessous.
2.4.1 Hématoxyline et Eosine (H&E) coloration
Des évaluations morphologiques ont été réalisées à l'aide d'hématoxyline et d'éosine. (H&E) coloration. Les tissus ont été fixés avec 4% paraformaldéhyde, incorporé dans de la cire de paraffine, et sectionné. Les coupes ont été colorées avec H&E, photographié au microscope orthographique (Olympe, BX53), et analysé à l'aide du logiciel de traitement d'image Image-Pro® Plus.
2.4.2 Coloration par immunofluorescence
Les coupes de tissus ont été colorées avec des anticorps contre le FLG, LOR, AQP3, et IVL. Les images ont été capturées à l'aide d'un microscope à fluorescence (Olympe, BX43). La densité optique intégrée (IOD) du signal de fluorescence a été quantifié avec le logiciel de traitement d'image Image-Pro® Plus. Le taux d'amélioration a été calculé comme (Échantillon de signal−Modèle de signal)/Modèle de signal×100 %.
2.4.3 Test ELISA
Les surnageants de culture tissulaire ont été traités pour mesurer la teneur en TSLP conformément aux instructions du kit ELISA..
2.5 Test cutané humain
Le test a été réalisé selon la méthode HRIPT décrite au chapitre 2 des spécifications techniques de sécurité chinoises pour les cosmétiques (2015 Edition). Brièvement, 30 bénévoles (4 les hommes et 26 les femelles), âgé 20 pour 49 années (âge moyen 30.90 ± 8.15 années), qui répondaient aux critères d'inclusion, participé à l'étude. Un échantillon de 0.020 – 0.025 g a été appliqué sur une zone de 50 mm² sur l'avant-bras (un échantillon par avant-bras) pour 24 les heures. Après 24 H, les échantillons ont été retirés, et la réponse cutanée a été évaluée à 0.5, 24, et 48 h post-traitement. La réponse cutanée a été enregistrée selon la méthode spécifiée.
2.6 Évaluation sensorielle
Dix volontaires répondant aux critères d'inclusion se sont lavés l'intérieur du bras gauche, je l'ai séché, et acclimaté à un environnement de (21.4 ~ 21.6) °C et (43~45) % humidité pour 30 min. Deux parcelles, chaque 3 cmx 3 cm, étaient marqués sur l'intérieur du bras gauche. Chaque parcelle a été décortiquée 3 fois en utilisant du ruban adhésif 3M et traité avec 1% histamine (2.0 ± 0.1)mg/cm². Les deux parcelles ont été analysées à l'aide d'un thermomètre cutané ST500. (Medelink, Canada) pour mesurer la température et un Antera 3D (Miravex, Irlande) mesurer la zone de rougeur. Puis, La crème AUS AD a été appliquée sur l'une des parcelles. Après 15 min, les deux parcelles ont été mesurées à nouveau à l'aide du Skin Therometer ST500 et d'Antera 3D.. Le taux d'amélioration a été calculé comme (SignifierT15 min−MoyenneT1)/SignifierT1×100 %. Les volontaires ont effectué des auto-évaluations de la sensation de démangeaison avant et 15 min après l'application de la crème AUS AD. Le niveau de sensation de démangeaison a été évalué sur une échelle de 0 pour 5, où 0 indiqué “imperceptible,” 1 “à peine perceptible,” 2 “perceptible,” 3 “niveau modéré,” 4 “démangeaisons sévères,” et 5 “douleur.”
2.7 Analyse statistique
Le logiciel GraphPad Prism a été utilisé pour analyser les données. Les résultats ont été exprimés en moyenne ± SD. Les comparaisons entre les groupes ont été effectuées à l'aide de tests t bilatéraux et de tests de rang signé de Wilcoxon., avec p< 0.05 considéré comme une différence significative.
3. Résultats
3.1 La crème Aus AD a présenté un excellent anti-S. aureusactivité
Le produit supprimé 99.99% de S. auréusdans 6 h traitement, indiquant que le produit peut supprimer efficacement la prolifération de S. auréus, qui est une bactérie dominante de la peau MA.
3.2 La crème Aus AD a atténué la toxicité du PolyI:C+LPS sur EpiKutis®skin
H&Résultats de la coloration E (figue. 1) a montré que par rapport au contrôle négatif, qui n'a montré aucune cellule d'apoptose, PolyI:Traitement C+LPS (contrôle du modèle) apoptose cellulaire induite, et positif, Crème désonide, et les groupes de crème AUS AD ont montré moins de cellules d'apoptose que le modèle témoin. Le comptage du nombre de cellules apoptoses a montré que le groupe modèle contenait 9.0 ±1,53 cellules d'apoptose, par rapport à laquelle le 0.01% traitement à la dexaméthasone (contrôle positif) réduit le nombre de cellules d'apoptose de 66.67% pour 3.0 ±1,15 (p= 0.006), Le traitement à la crème au désonide a réduit le nombre de cellules d'apoptose de 44.44% pour 5.0 ±0,58 (p= 0.013), et le traitement à la crème AUS AD a réduit le nombre de cellules d'apoptose de 66.67% pour 3.0 ± 1.00 (p= 0.006). Ces résultats ont montré que la crème AUS AD atténuait la toxicité du PolyI:C+LPS à in vitropeau.
figue. 1 La crème AUS AD atténue la toxicité du PolyI:C + LPS sur EpiKutis® Skin.A) H&Coupes de peau colorées par E avec des cercles jaunes indiquant des cellules apoptotiques représentatives. B)quantification des cellules apoptotiques. Modèle: PolyI:C + LPS (24 µg/mL PolyI:C + 20 µg/mL de LPS). Positif: 50 µM WY1464. Barre d'échelle: 50 µm. ## p< 0.01 (par rapport au contrôle négatif). * p< 0.05 et **p< 0.01 (par rapport au modèle de contrôle).
3.3 La crème Aus AD a présenté une excellente efficacité réparatrice in vitro
Analyse par immunofluorescence, comme le montrent les images représentatives (Figues. 2AC), démontré des signaux de fluorescence variables pour le FLG, LOR, et IVL. Le contrôle négatif présentait le signal de fluorescence le plus fort, suivi de la crème AUS AD, contrôle positif, Crème désonide, et contrôle du modèle. L'intensité du signal FLG (figue. 2ré) a été mesuré comme 1.0 ± 0.09 pour le contrôle négatif, 0.3 ± 0.05 pour le contrôle du modèle, 0.7 ± 0.04 pour le contrôle positif, 0.5 ± 0.07 pour la crème Désonide, et 0.81 ± 0.02 pour le groupe crème AUS AD. Le modèle contrôle considérablement (p< 0.001) signal FLG réduit dans la peau. Par rapport au contrôle du modèle, le contrôle positif, Crème désonide, et la crème AUS AD a augmenté le niveau de FLG de 133.3% (p< 0.001), 666.7% (p = 0.013), et 170.00% (p< 0.001), respectivement. Le niveau de FLG dans le groupe crème AUS AD était significativement (p= 0.002) supérieur à celui de la crème Desonide. L'intensité du signal LOR (figue. 2E) était 1.0 ± 0.04 pour le contrôle négatif, 0.26 ± 0.01 pour le contrôle du modèle, 0.72 ± 0.01 pour le contrôle positif, 0.51 ± 0.03 pour la crème Désonide, et 0.84 ± 0.0.5 pour le groupe crème AUS AD. Le modèle contrôle considérablement (p< 0.001) réduction du signal LOR dans la peau. Par rapport au contrôle du modèle, le contrôle positif, Crème désonide, et la crème AUS AD a augmenté le niveau de LOR de 176.29% (p< 0.001), 9.15% (p= 0.001), et 223.08%(p<0.001),respectivement. Le niveau de LOR dans le groupe crème AUS AD était significativement (p= 0.001) supérieur à celui de la crème Desonide.
L'intensité du signal IVL (figue. 2F) était 1.0 ± 0.05 pour le contrôle négatif, 0.30 ± 0.0.1 pour le contrôle du modèle, 0.77 ± 0.03 pour le contrôle positif, 0.4 ± 0.3 pour la crème Désonide, et 0.85 ± 0,5pour le groupe crème AUS AD. Le modèle contrôle de manière significative(p< 0.001) réduction du signal IVL dans la peau. Par rapport au contrôle du modèle, le contrôle positif, Crème désonide, et la crème AUS AD a augmenté le niveau IVL de 156.67% (p< 0.001), 80.00% (p< 0.001) et 183.3% (p < 0.001), respectivement. Le niveau IVL dans le groupe crème AUS AD était significativement (p= 0.001) supérieur à celui de la crème Desonide. Ces données suggèrent que la crème AUS AD répare efficacement les dommages cutanés induits par le PolyI.:C + Traitement LPS, avec une efficacité réparatrice supérieure à la crème Desonide.
Fig.2AUS AD crème réparée EpiKutis®peau en augmentant le FLG, LOR, et niveaux IVL. A à C areFLG, LOR, et coupe de peau immuno-colorée IVL respectivement. D à F sont l'intensité du signal mesurée du FLG,LOR,et IVL respectivement. Modèle: PolyI:C+LPS(24μg/mL+20 μg/mL). Positif: 50 µM WY14643. Barre d'échelle: 50 µm. ### p< 0.001 (par rapport au contrôle négatif), *p< 0.05 et ***p< 0.001 (par rapport au contrôle du modèle).
3.4 La crème Aus AD a montré une efficacité d'hydratation in vitro
Analyse par immunofluorescence de l'AQP3 (figue. 3UN) a révélé que le contrôle négatif présentait le signal AQP3 le plus fort, suivi de la crème AUS AD, contrôle positif, Crème désonide, et contrôle du modèle. L'analyse de l'intensité du signal AQP3 (figue. 3B) démontré que par rapport au contrôle négatif, qui a été arbitrairement fixé comme 1.0, le modèle contrôle de manière significative (p<0.001) réduit le signal AQP3 à 0.4 ± 0.04, indiquant que PolyI:C + Le LPS a induit un défi de déshydratation cutanée. En revanche, le contrôle positif (50 µM WY1463), Crème désonide, et la crème AUS AD ont augmenté le niveau d'AQP3 à 0.79 ± 0.05 (par 132.5%, p< 0.001), 0.5 ± 0.03 (par 132.5%, p= 0.002), et 0.83 ± 0.03 (par 132.5%, p< 0.001), respectivement. Ces résultats indiquent que 50 µM WY1463, Crème désonide, et la crème AUS AD pourraient atténuer considérablement l'état de déshydratation provoqué par PolyI:C + LPS, l'efficacité hydratante de la crème AUS AD étant significativement (p< 0.001) supérieur à celui de la crème Desonide.
Fig.3La crème AUS AD a augmenté le niveau d'AQ3 dans PolyI:EpiKutis traité par C+LPS®peau. UN) Coupes de peau immuno-colorées AQP3. B) Niveaux APQ3. Modèle: PolyI:C+LPS. Positif: 50 µM WY14643. Barre d'échelle: 50 µm. ## p< 0.01 (par rapport au contrôle négatif), **p< 0.01et ***p< 0.001 (par rapport au contrôle du modèle).
3.5 La crème Aus AD a exercé une forte efficacité apaisantein vitro
Les résultats de l'analyse ELISA ont montré que le TSLP était 2.76 ± 0.32 pg/mL dans le contrôle négatif, 17.86 ± 0.80 pg/mL dans le contrôle du modèle, ce qui signifie PolyI:C+LPS de manière significative (p<0.001) niveau de TSLP induit. Par rapport au contrôle du modèle, La crème de désonide induit l'apoptose cellulaire, et moins de cellules d'apoptose identifiées en positif, 0.01% dexaméthasone, Crème désonide, et la crème AUS AD ont diminué le niveau de TSLP à 5.22 ± 0.49 pg/mL (70.77% diminuer, p< 0.001), 8.52 ± 0.32 pg/mL (52.30% diminuer, p< 0.001), et 5.86 ± 0.18 pg/mL (67.19% diminuer, p< 0.001), respectivement. Cela signifie 0.01% dexaméthasone, Crème désonide, et la crème AUS AD pourraient atténuer considérablement l'irritation causée par PolyI:C+LPS, et l'efficacité apaisante de la crème AUSAD était significative (p< 0.001) plus fort que la crème Desonide.
figue. 4 La crème AUS AD a diminué le niveau de TSLP dans le milieu de culture de PolyI:EpiKutis traité par C+LPS® peau. Modèle: PolyI:C+LPS(24 µg/mL+ 20 µg/mL). Positif: 0.01% dexaméthasone. ###p<0.001(par rapport au contrôle négatif),et***p<0.001(par rapport au contrôle du modèle).
3.6 La crème AUS AD était douce et non irritante pour la peau humaine en général
La crème AUS AD a été soumise à un patch test sur l'homme pour évaluer son potentiel de douceur et de non-irritation sur la peau humaine.. L'étude impliquée 30 des volontaires qui ont appliqué la crème sur leur peau. Les résultats ont démontré qu'aucun des participants n'a présenté de réactions indésirables au produit., ce qui suggère que la crème AUS AD est à la fois douce et non irritante pour la peau humaine en général. Cette découverte confirme le profil de sécurité de la crème pour une utilisation potentielle dans les applications de soins de la peau..
3.7 La crème AUS AD a montré une excellente efficacité apaisante in vivo
3.7.1 La crème AUS AD apaise efficacement les irritations causées par l'histamine
La crème AUS AD a démontré des effets apaisants significatifs sur les irritations cutanées induites par un 1% application d'histamine. Données de température mesurées par la machine (Tableau 1) a indiqué que les températures des deux sites de test étaient comparables immédiatement après l'application d'histamine. Cependant, 15 quelques minutes plus tard, le groupe témoin modèle présentait une température élevée et soutenue(p= 0.29), alors que le traitement à la crème AUS AD est significatif(p< 0.001) réduit la température de 4.36%. Mesures de la zone de rougeur (Tableau 2)a révélé que la rougeur des deux sites était similaire immédiatement après l'application, mais 15 quelques minutes plus tard, le groupe témoin modèle a maintenu une zone de rougeur plus élevée (p= 0.59), tandis que le traitement à la crème AUS AD est considérablement (p= 0.025) réduit les rougeurs de 4.94%. Résultats de l'évaluation des démangeaisons (Tableau 3) a indiqué que même si l'évaluation des démangeaisons s'était améliorée de manière significative (p= 0.044) par 33.3%, l'amélioration du groupe crème AUS AD (37.50%, p= 0.019) était significativement supérieur à celui du groupe témoin modèle. Ces résultats soulignent l’excellente efficacité apaisante in vivo de la crème AUS AD.
Tableau 1.La crème AUS ASD a considérablement réduit la température de la surface de la peau après 1% application d'histamine. N=10.
Tableau 2.La crème AUS ASD a considérablement réduit la zone de rougeur cutanée causée par un 1% application d'histamine. N=10.
Tableau 3.La crème AUS ASD a considérablement réduit les démangeaisons cutanées causées par un 1% application d'histamine. N=10.
4.Discussion
Cette étude présente le développement de la crème AUS AD, une formulation innovante adaptée aux personnes atteintes de dermatite atopique (ANNONCE). Notre approche est multiforme: (1) intégrant des ingrédients de base historiquement doux et non irritants, (2) utilisant des extraits naturels de plantes, notamment Artémisia annuellefeuille, Crocus sativusfleur, et Pueraria lobataextraits de racines pour atténuer les réactions allergiques et l’inflammation, (3) employer des agents antimicrobiens contre S. auréusavec des extraits de plantes comme Artémisia annuelle, et (4) incorporant des ingrédients actifs, dont le céramide NP/AP/EOP,ADH,ectoïne,biosaccharidegomme-2, glycérol,squalane,et de la vaseline pour renforcer la réparation de la peau, hydratation, et protection. Nos résultats démontrent que la crème AUS AD présente des propriétés anti-S significatives.. efficacité de l'aureus, réaliser un remarquable 99.99% réduction de la croissance bactérienne. en outre, par rapport à la crème pharmaceutique Desonide, La crème AUS AD a démontré une protection cutanée supérieure, réparation améliorée de la barrière cutanée (comme en témoigne l'augmentation du FLG, LOR, et IVL, et diminution du TSLP), et une meilleure hydratation de la peau (comme l'indiquent les niveaux élevés d'AQP3) lorsqu'il est testé sur une peau EpiKutis® testée avec PolyI:C et LPS. En outre, La crème AUS AD réduit efficacement la température de la peau, rougeur cutanée réduite, et une diminution des démangeaisons induites par 1% histamine. Collectivement, ces résultats mettent en évidence le potentiel substantiel de la crème AUS AD en tant que produit de soin quotidien pour les consommateurs de MA. Des études supplémentaires sont nécessaires pour explorer l'efficacité de la crème AUS AD en matière de soins de la peau chez les patients atteints de MA..
5. Conclusion
La crème AUS AD a montré un excellent effet apaisant, hydratation, et efficacité réparatrice in vitroet en vain, démontrant son adéquation aux consommateurs à la peau fragile et sensible et même aux consommateurs de MA.
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Alice Zhang
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